在高效液相色譜(HPLC)分析中,
安捷倫色譜柱的選擇直接決定分離效果與實驗效率。安捷倫的反相、正相及HILIC系列色譜柱憑借優異性能覆蓋各類應用場景。核心選擇邏輯可概括為:根據化合物極性、溶解性及檢測需求,匹配色譜柱的固定相特性與流動相體系,以下是詳細指南。
反相色譜柱:通用型分離
反相色譜柱是實驗室常用的類型,其固定相為非極性(如C18、C8鍵合相),流動相為極性混合溶劑(水-甲醇/乙腈),分離機理基于“相似相溶”——弱極性至中等極性化合物與固定相作用力更強,保留時間更長。
安捷倫反相色譜柱具備高柱效與優異峰形,尤其適合藥物、脂類、小分子有機物等分析場景。選擇要點包括:分析物為非極性或中等極性、在水相或水-有機混合溶劑中溶解性良好;需高分辨率分離或梯度洗脫方案時,反相柱是優解。例如,藥物雜質檢測、環境污染物分析等常規實驗,優先選用反相色譜柱。
正相色譜柱:極性化合物與異構體分離利器
正相色譜柱采用極性固定相(如硅膠、氨基(-NH?)、氰基(-CN)鍵合相),流動相為非極性溶劑(正己烷、異丙醇),通過氫鍵、偶極-偶極作用實現分離——極性越強的化合物與固定相結合越牢固,后流出體系。
安捷倫正相柱適用于糖類、氨基酸、異構體等強極性或中等極性化合物分析。選擇場景明確:當分析物在非極性溶劑中溶解性好,或需分離結構相似的異構體時,正相柱優勢顯著。需注意,正相柱對水分敏感,需嚴格控制流動相含水量,更適合等度洗脫模式。
HILIC色譜柱:強極性水溶性化合物的補充方案
親水相互作用色譜(HILIC)是反相、正相的重要補充,采用極性固定相(如裸硅膠、酰胺基)與高比例有機相-水相流動相(乙腈-水,水相占比3%-40%),通過水膜分配與氫鍵作用保留強極性水溶性化合物——這類物質在反相柱中幾乎無保留,在正相柱中溶解性不佳。
安捷倫系列專為強極性小分子設計,耐水性強、LC/MS兼容性好,尤其適合糖類、尿素、磷酸化化合物等分析,還可替代離子對色譜用于EPA方法1694。選擇關鍵:分析物為強極性水溶性物質,或需匹配質譜檢測器時,HILIC柱是理想選擇。使用時需注意保持流動相有機相比例不低于40%,避免磷酸鹽緩沖液析出。